厌氧培养箱的操作指导有哪些

厌氧培养箱是用于培养厌氧微生物的关键设备，通过创造无氧环境满足厌氧菌的生长需求。以下是详细的操作指导及注意事项：

一、操作前准备
1. 环境检查
  确保培养箱放置平稳，周围无强电磁干扰，通风良好。
  检查电源、气源（如氮气、氢气、二氧化碳混合气）连接是否正常。
2. 气密性检测
  关闭所有阀门，启动真空泵抽真空至 0.08 MPa，关闭阀门并观察压力表，5分钟内压力变化应≤0.01 MPa。
3. 耗材准备
  预还原培养基（如硫乙醇酸盐流体培养基）、厌氧指示剂（如美蓝或刃天青）、无菌手套、培养皿等。

二、操作步骤
1. 系统启动
  打开电源，启动控制面板，设置温度（通常35 37℃）和气体参数（如85% N₂、10% H₂、5% CO₂）。
2. 置换箱内气体
  抽气 充气循环：
1. 抽真空至 0.08 MPa。
2. 充入混合气体至常压，重复3 5次（确保O₂浓度<1%）。
  持续冲洗法：以10 15 L/min流速通入混合气30分钟。
3. 厌氧环境验证
  放置厌氧指示剂于箱内，30分钟后应无色（若为美蓝，蓝色表示有氧）。
4. 样品转移与培养
  传递舱操作：
1. 外门放入样品后关闭，抽真空并充气（重复2 3次）。
2. 通过内门将样品移入主箱体。
  培养时间根据菌种调整（如脆弱拟杆菌需48小时）。

三、使用后处理
1. 清洁消毒
  用75%乙醇或专用消毒剂擦拭内壁、手套袖套。
  传递舱每次使用后需消毒。
2. 气体与电源管理
  关闭气瓶阀门，排空管路余气。
  长期不用时每周开机1次维持干燥。

四、注意事项
1. 安全警示
  氢气易燃，操作时严禁明火，确保防爆设施完好。
  箱内压力禁止超过0.02 MPa。
2. 故障处理
  漏气：检查门封、袖套是否破损，用肥皂水检测漏点。
  温度异常：校准传感器或检查加热元件。
3. 质量控制
  每周用化学指示剂验证厌氧条件。
  定期更换催化剂（如钯粒，每3 6个月或活性下降时）。

五、常见问题解答
  Q：培养箱无法维持厌氧状态？
A：检查气瓶压力、催化剂活性及系统密封性。
  Q：传递舱门打不开？
A：确认内外门压力平衡，避免强行开启。