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厌氧培养箱的操作规程

发布时间:2022-09-07      点击次数:70

厌氧培养箱的操作规程
(一)操作室厌氧环境形成:
1. 按使用要求放置好必要的附件和器具;
2. 通电源开照明灯,开温控仪,调节所需温度;
3. 操作室内放入1000g钯粒(封闭)和500g干燥剂,并放入美兰指示纸(封闭);
4. 关紧取样室内外门,并抽真空校验;
5. 操作室内初次置换(氮气置换):
A. 把乳胶手套套在观察板法兰圈上并扎紧
B. 接通氮气进气路,打开氮气控制阀1,使手套鼓起,关闭阀门1,然后扎紧袋口;
6. 操作室D二次置换(氮气置换)重复一次充氮过程,取样室先抽真空,并注意随时用脚踏开关开闭排气。如此连续三次氮气置换。
7. 操作室D四次置换(混合气体置换):
(混合气体配比为N2 85%、H2 10%、CO2 5%)
A. 调换气路打开混合气阀3进气,充气时取样室先抽真空,并随时用脚踏开关开闭排气;
B. 关掉混合气体阀3,并打开阀5,使混合气体经过流量计,调整流量计,流量为每分钟10ml左右;
C. 混合气体重复2-3次转换,经过上述过程,基本形成厌氧环境。
8. 操作室内打开粑粒除氧剂,接通除氧催化器电源进行催化除氧,一小时后打开美兰指示纸观察其变色状况,不变色为操作室内达到厌氧环境;
9. 开紫外线灭菌灯,室内进行灭菌处理,灭菌时间按具体实验自定。
(二)菌种的置入和培养:
1. 检查取样室内门并关紧;
2. 打开取样室外门,将菌种放入取样室后即关上外门;
3. 取样室充氮置换三次过程:打开真空泵,先抽真空度500ml汞柱(66kPa)以上停,然后人工打开氮气阀2进气,使指针回复零位,关掉阀2。D二次重复操作一次。D三次操作时,使真空度500ml汞柱(66kPa)以上停,然后打开阀4进混合气,使指针回复零位,关掉阀4。取样室充氮置换三次过程结束;
4. 如选定真空度较低就需要增加置换的次数;
5. 取样室外门开启、关紧,再抽低真空度100ml汞柱(13kPa)检验;
6. 厌氧培养箱需要长期连续使用的条件:
A. 每天在操作室内打开美兰指示纸观察,如不正常就重新换气;
B. 要长期连续输入微量的混合气体,使补进的氮气能和微量的氧结合通过催化吸收,保证室内厌氧状态,补入混合气流量选定为每分钟10ml左右;
C. 连续培养运行一天,更换一次除氧剂和干燥剂。
D. 操作室内温度可任意选择和控制。
7. 混合气瓶、氮气瓶输出压力调整:调节减压阀,使输出压力0.1Mpa左右。

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